Ca++Mg++ ——ATP酶测试盒
测定方法:     微量法
测定规格:    100管/48样
保存条件:     低温避光保存
有 效 期:     6个月
注    意:       正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
Ca++ Mg++-ATP酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中,可催化ATP水解生成ADP和无机磷。

测定原理:
根据Ca++ Mg++-ATP酶分解ATP生成ADP及无机磷,通过测定无机磷的量来确定ATP酶活性高低。

需自备的仪器及用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

样品酶液的制备:
1、细胞或组织样品的制备:
培养细胞:先收集或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万或细胞加入1mL提取液),超声波破碎或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。

注意事项:
1、由于每一个样都必须做对照,本试剂盒100管只能测 48份Ca++ Mg++-ATP酶。
2、此法具有微量、灵敏、快速的特点。所以对测定所用试管要求严格无磷。避免磷污染是检测成败的关键。
3、空白管和标准管只要做一管。
Ca++ Mg++-  ATPase活力的计算:
1、血清(浆)Ca++ Mg++-  ATPase活力的计算:
定义:每小时每毫升血清(浆)中Ca++ Mg++- ATP 酶分解ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。
Ca++ Mg++-ATP酶活力(μmol/h/mL)= [C标准管×V总]×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷V样÷T=7.5×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
2、组织、或细胞中Ca++ Mg++-  ATPase活力的计算:
(1)按蛋白浓度计算:
定义:每小时每毫克组织蛋白中Ca++ Mg++- ATP 酶分解ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。
Ca++ Mg++-ATP酶活力(μmol/h / mg prot)= [C标准管×V总]×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷(V样×Cpr)÷T =7.5×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
定义:每小时每克组织中Ca++ Mg++-ATP 酶分解ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。
Ca++ Mg++-ATP酶活力(μmol/h /g 鲜重)=[C标准管×V总]×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷(W× V样÷V样总)÷T=7.5×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
(3)按或细胞密度计算:
定义:每小时每1万个或细胞中Ca++ Mg++-ATP 酶分解ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。
Ca++ Mg++-ATP酶活力(μmol/h /104 cell)= [C标准管×V总]×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷(500×V样÷V样总)÷T=0.015×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)

C标准管:标准管浓度,0.5μmol/mL;V总:酶促反应总体积,0.25mL;V样:加入样本体积,0.1mL ;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,1/6小时;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;500:或细胞总数,500万。