一、流动相的要求
     液相色谱是样品的组分在柱填料和流动相之间质量交换来达到分离的要求，所以实验室要求流动相需要举报下面几个特点。

1、纯度
  
  流动相需要按照规定使用HOLC的试剂。使用的时候过滤去除里面的颗粒性杂质或者一些别的物质。如果溶剂里面杂质过多，会导致色谱柱的寿命降低。


2、溶解度 
   
    样品的溶解度需要合适，不能过大或者过小。如果溶解的样品不好会导致柱头沉淀，不光是影响分离还会导致色谱柱使用寿命降低。


3、粘度

粘度要低(应<2cp) ，高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。******选择沸点在100℃以下的流动相。

4、样品易于回收。应选用挥发性溶剂。

5、流动相PH 

采用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在;对弱碱，情况相反。分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液;分析弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。 

二、色谱泵的使用与维护

为了延长泵的使用寿命和维持其输液的稳定性，必须按照下列注意事项进行操作：  

1 防止任何固体微粒进入泵体，因为尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先除去流动相中的任何固体微粒。流动相******在玻璃容器内蒸馏，而常用的方法是滤过，可采用Millipore滤膜(0.2μm或0.45μm)等滤器。泵的入口都应连接砂滤棒(或片)。的滤器应经常清洗或更换。  

2 泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，***终产生漏液。    

3 的工作压力决不要超过规定的******压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液。

三、色谱柱的使用与维护

在日常分离分析工作中，色谱柱的正确使用和维护十分重要，色谱柱使用是否得当，直接影响色谱柱的寿命，在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。 

1 柱子在装卸、更换时，动作要轻，接头拧紧要适度。必须防止较强的机械振动，以免柱床产生空隙。

2 如果仪器用来做常规分析，样品种类有限，但分析次数多，则不妨为每一类常规分析配置一根专用柱，这样有助于延长柱子的寿命。 

3 避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。 

4 应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。 

5 如使用柱温控制装置时，应注意在通人流动相后才能升温。

6 一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。 

7 选择使用适宜的流动相，以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一个预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。 

8 避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注人柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一个保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。 

9 经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50-75mL。 

10 保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。******禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。 

11 色谱柱在使用的时候，如果压力突然增高，可能是烧结滤片堵塞，这个时候应该考虑清洗滤片或者更换滤片。还有一种可能***是大分子进入了色谱柱里面，。导致色谱柱柱头污染。如果柱效降低或者色谱峰变形，那么可能回事柱头塌陷或者死体积过大。  

12 在完成分离分析工作之后，不应立即停机，需及时对色谱分析系统进行冲洗，一般0.5h以上，以除去色谱柱内的杂质。