Pctrifilm TM酵母菌和霉菌(Pctrifilm TM Yeast and Mold, PYM)3M测试片是一种预先制备好培育基的霉菌和酵母菌计数的卡片。培育基中有作为载体的冷水可溶性凝胶和对酵母菌和霉菌敏感的5-溴-4-氯-3吲哚基-磷酸盐指示剂，以及按捺**成长的四环素、。圆形成长区域划分为30个1 cm x1 cm的方格用来计数。

(二)设备和资料

恒温培育箱(25 ℃~28 ℃),冰箱(0℃~4℃),均质器(旋刀式或拍击式),移液器， Pctrifilm TM测验片压板，振荡器，天平(感量0.1 g),培育基和试剂， Pctrifilm TM酵母菌和霉菌3M测试片，稀释液， Butterfield's磷酸盐缓冲液， 0.1%蛋白胨水。

（三）操作

1.固体

以无菌操作将25 g样品加入到225 mL的稀释液(磷酸盐缓冲液或0.1%蛋白胨水)中，8000 r/min均质2 min (或放入无菌均质袋中，用均质器敲打2min),制成1 :10样品匀液。

2.液体

取25 mL样品原液，放入装有225 mL,稀释液的无菌玻璃瓶中，以30 cm起伏， 7s内振摇25次，制成1 : 10样品匀液。

将上述匀液做10倍系列梯度稀释，根据样品的污染程度，选择适宜的2个-3个连续稀释度，每个稀释度接种2张测验片。

将PYM查验测验片放在平整的试验台上，揭开上层膜，用移液器将1 ml样液加到测验片的，悄悄覆盖上层膜，用压板平稳压下，使其均匀覆盖在测验片的圆形培育面积上，拿起压板，静置至少1 min,使培育基凝固。

将测验片的通明面朝上放置于培育箱内，堆叠不能超过20片，在25℃-28 ℃下培育3d-5d。

3.判读

培育3d后调查计数，假如5d后，测验片上的菌成长过快，呈现边际含糊的菌落，就用3d的计数成果作为估量菌落数。

在PYM测验片上，色彩均匀一致，灰白色到蓝绿色或粉红色，没有暗色中心，鸿沟显着的小型隆起菌落计为酵母菌。色彩多样(棕色、米色、橙色、蓝绿色等)、中心色彩深暗的大型或小型扁平分散菌落计为霉菌。

3M测试片

(四)成果核算

选取菌落数在15~150之间的测验片计数，平均菌落数乘以稀释倍数陈述。

①假如所有稀释度的测验片上均无菌落成长，则以小于1乘以低稀释倍数陈述。

②假如所有稀释度测验片上的菌落数都小于15,则计数稀释度低的测验片上的平均菌落数乘以稀释倍数陈述。

③假如高稀释度的菌落数大于150,计数高稀释度的测验片上的平均菌落数乘以稀释倍数陈述。计数菌落数大于150个的测验片时，可计数一个或两个具有代表性方格内的菌落数，换算成单个方格内(1cm2)的菌落数后乘以30即为测验片上预算的菌落数(圆形成长面积为30 cm)。

计数在测验片上呈现堆积和彼此覆盖的霉菌菌落，可将测验片分红几个区域，核算每个显着暗色中心的菌落。很多的酵母菌或许会导致整个成长区域呈现蓝色，很多的霉菌也可导致整个成长区域呈现蓝、黑、黄等色彩，此刻测验片或许没有可见菌落，但圆形培面积的边际有许多小型菌落。当产生这种情况时，不要预算菌落数，其成果计为“多不可计“ (too numerous to count, C)。

陈述每克或每毫升样品中霉菌、酵母菌数，以“CFU/g或CFU/mL"表明。