细菌 大肠杆菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌、、产气肠杆菌培养基 明胶培养基试管、石蕊乳试管、尿素琼脂试管、蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基、葡萄糖各3个发酵管、3个乳糖发酵管。 溶液及试剂 甲基红指示剂、5%萘酚、、吲哚试剂 仪器及其他耗材 接种针 大分子物质水解试验（1）证明不同微生物对各种有机大分子物质具有不同的水解能力，从而说明不同微生物有不同的酶系统; （2）掌握微生物大分子水解实验的原理和方法。 IMViC测试 了解IMViC与硫化氢反应的原理及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。 糖发酵试验（1）了解糖发酵的原理及其在肠道细菌鉴定中的重要作用。 （2）掌握通过糖发酵鉴定不同微生物的方法。 大分子物质水解试验 微生物不能直接利用淀粉、蛋白质、脂肪等大分子物质，必须依靠产生的胞外酶分解大分子物质，才能被微生物吸收利用。 细胞外酶主要是水解酶，它通过加水将大分子物质裂解成更小的化合物，以便运输到细胞内。 明胶是胶原蛋白水解产生的蛋白质。 25%以下可以保持凝胶状态并以固体形式存在，而明胶在25%以上就会液化。 有些微生物能产生明胶酶，水解明胶蛋白，使明胶液化，4小时后仍能保持明胶状态。 有些微生物可以水解牛奶中的酪蛋白。 石蕊乳培养基由脱脂乳和石蕊制成。 它是浑浊的蓝色。 酪蛋白水解成氨基酸和肽后，培养基会变得透明。

石蕊奶也用于检测乳糖发酵。 在酸存在下，石蕊变成粉红色。 过量的酸会导致牛奶凝固（凝乳形成）。 氨基酸的分解引起碱性反应，石蕊变成紫色。 某些细菌可以减少石蕊，使试管底部变白。 脲酶分解尿素释放氨。 尿素琼脂含有尿素、葡萄糖和酚红。 酚红在 pH 6.8 时呈黄色。 在培养过程中，产脲酶细菌会分解尿素产生氨，培养基的pH值会升高。 pH 值为 8.4 时，指示剂变成深粉色。 IMViC测试 有些细菌产生酶，分解蛋白胨中的，产生吲哚和丙酮酸。 吲哚与对二甲氨基苯甲醛结合形成红玫瑰色吲哚。 但并非所有微生物都具有分解产生吲哚的能力，因此吲哚试验可作为生化检测指标。 吲哚反应对大肠杆菌呈阳性，对产气肠杆菌呈阴性。 甲基红试验用于检测葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。当细菌代谢糖产生酸时，培养基就会呈酸性，将甲基红添加到培养基中。培养液由橙黄色（pH6.3）变为红色（pH4.2），即甲基红反应。 使用此测试可以区分大肠杆菌和产气肠杆菌。 这两种细菌在培养初期均产生有机酸，但大肠杆菌在培养后期仍能维持酸性pH 4，而产气肠杆菌则将有机酸转化为非酸性终产物，如乙醇、丙酮酸等。等，使pH升高约6。因此大肠杆菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。

VP 测试用于确定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性最终产物（例如丙酮酸）的能力。 丙酮酸经缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性条件下可被空气中的氧气氧化为二乙酰。 蛋白胨中的二乙酰与反应生成红色化合物，即VP试验为阳性，若不生成红色化合物，则反应为阴性。 产气肠杆菌阳性，大肠埃希菌阴性。 硫化氢测试也是一种检查肠道细菌的生化测试。 硫化氢试验是检测硫化氢的产生量，也是检查肠道细菌常用的生化试验。 有些细菌能分解含硫有机物如、半、蛋氨酸等产生硫化氢，硫化氢与铅盐或铁盐在培养基中形成黑色硫化铅或硫化亚铁沉淀物。 产气肠杆菌阳性，大肠埃希菌阴性。 糖发酵试验糖发酵试验常用于微生物的鉴定，是一种生化反应，对于肠道细菌的鉴定尤为重要。 不同的细菌分解糖类物质的能力有很大差异。 有些细菌能分解某些糖类，产生有机酸（如乳酸、乙酸、丙酸等）和气体（如氢气、甲烷、二氧化碳等），有些细菌只产生酸而不产生气体。 例如，大肠杆菌可以分解乳糖和葡萄糖产生酸和气体，普通变形杆菌可以分解葡萄糖产生酸和气体，但不能分解乳糖。 糖发酵管含有蛋白胨、指示剂（溴甲酚紫）和不同的糖。 当发酵产生酸时，溴甲酚紫色指示剂可由紫色（pH6.8）变为黄色（pH5.2）。

气体的产生通过发酵管中是否存在气泡来证明。 脲酶分解尿素释放氨。 尿素琼脂含有尿素、葡萄糖和酚红。 酚红在 pH 6.8 时呈黄色。 在培养过程中，产脲酶细菌会分解尿素产生氨，培养基的pH值会升高。 pH 值为 8.4 时，指示剂变成深粉色。 4、操作步骤（1）大分子物质水解试验明胶水解试验（1）取3支明胶培养基试管，用记号笔在每管表面接种菌种名称。 (2)用接种针分别穿刺接种枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、。 （3）将接种后的试管置于20℃培养2-5次石蕊乳试验（1）取2支石蕊乳培养基试管，在每管表面用记号笔标出接种菌种名称。 (2)用接种针分别穿刺接种普通变形杆菌和。 (3)将接种后的试管在35℃孵育24-48小时。 (4)观察培养基颜色变化。 石蕊在酸性条件下呈粉红色，在碱性条件下呈紫色，还原时呈白色。 尿素试验（1）取2支尿素培养基试管，用记号笔在每管上标出待接种菌的名称。 (2)分别接种普通变形杆菌和。 (3)将接种后的试管在35℃孵育24-48小时。 (4)观察培养基颜色变化。 存在脲酶时呈红色，不存在脲酶时呈黄色。 (2) IMViC 试验接种及培养 (1) 用接种针将大肠杆菌和产气肠杆菌穿刺到两支醋酸铅培养基中(硫化氢试验)，在 37℃ 48℃下培养 (2) 将大肠杆菌和产气肠杆菌插入两支醋酸铅培养基中(硫化氢试验)。分别用葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红和VP试验），37℃培养48℃观察结果（1）硫化氢试验：培养48小时后，观察黑色硫化铅的产生。

(2)甲基红试验：培养48小时后，在葡萄糖蛋白胨水培养物中加入2滴甲基红试剂，培养基变红色为阳性，黄色为阴性。 (3) VP试验：将A液加入葡萄糖蛋白胨水培养物中，再加入等量B液，剧烈振荡，放置3715-30min，加快反应速度，若培养物呈红色，则说明VP 测试呈阳性。 (3)糖发酵试验将接种后的发酵管和对照发酵管置于37℃下培养24-48小时。 观察发酵管颜色，是否有气泡。 每次试验需接种的菌种： （1）明胶水解试验：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、 20 （2）石蕊乳试验：普通变形杆菌、 3524-48 （3）尿素试验：普通变形杆菌、3524-48 （4）糖发酵试验：葡萄糖发酵管、乳糖发酵管：大肠杆菌、普通变形杆菌 3724-48 （5）硫化氢、甲基红、VP 试验：大肠杆菌、产气肠杆菌 3748 试验结果判定：（1 ） 明胶水解试验：明胶液化 明胶不液化（-） （2）石蕊乳试验：酸性条件下呈粉红色，碱性条件下呈紫色，还原时呈白色。 （3）尿素试验：红色为脲酶阳性，黄色为脲酶阴性（4）糖发酵试验：产酸为黄色，（+）（5）硫化氢：中黑色为HS阳性（6）甲基红：添加甲基红试剂，红色为阳性，黄色为阴性（7）VP试验：先加入A液，再加入B液，反应15-30分钟。红色为阳性