章节前言 缩短优球蛋白的溶解时间，增加优球蛋白的纤溶活性，还可促进血管内皮细胞的生成，从而起到良好的溶栓作用。 作为一种潜在的溶栓药物，它具有以下优点【来源于传统的发酵食品，安全且可被消化道吸收，因此具有成为口服药物的可能性。 分子量小的单链蛋白质可能更容易被人体消化吸收。 对纤维蛋白的作用机制不同于目前其他临床药物。 具有直接的纤溶作用，也能激活体内的纤溶作用。 中国台湾学者从中国台湾“纳豆芽孢杆菌”突变菌株的固体发酵产物中，纯化出一种具有高纤溶活性的蛋白酶。 在芽孢杆菌大豆发酵制品中发现了具有良好耐热性的纤溶酶，其分子量。 韩国学者也报道，在大豆芽孢杆菌发酵产物中发现了一种具有纤溶活性分子量的蛋白酶[引自中国学者，对此也开展了一些研究工作。 严家奇[虫，韩润林[嗍]从我国纳豆和豆豉中分离出产纤溶酶的枯草芽孢杆菌，纯化发酵产物中的纤溶活性成分，并进行生化性质研究。 黑龙江省应用微生物研究所分离出产纤溶酶的枯草芽孢杆菌[并对枯草芽孢杆菌产酶的发酵条件进行了初步研究。 法国学者2010年报道从链霉菌发酵液中分离纯化出一种具有纤溶活性的蛋白酶【2008年又报道从链霉菌中分离出纤维蛋白特异性纤溶酶，进一步优化产酶条件【呵呵】。

王军和吴林传从土壤中筛选产生多种纤溶活性成分的链霉菌，分离出单肽链蛋白酶，即丝​​氨酸。 同源性高。 不仅具有直接降解纤维蛋白的作用，还能激活纤溶酶原。 分子量大时，稳定性较好。 将其末端序列与各种已知纤溶酶和纤溶酶原激活剂的序列进行比较，未发现相似性。 链霉菌产生和分泌多种蛋白水解酶，其中相当一部分属于蛋白酶，人血液中的纤溶酶和纤溶酶原激活物也属于蛋白酶。 从链霉菌中筛选合适的溶栓药物是可能的。 刘晨光等报道从海洋中筛选出产生纤溶酶的假单胞菌[. 与陆地微生物相比，海洋微生物具有耐盐、耐高压、耐低温等独特的生理特性，因此海洋微生物是为人类提供更好的新型生物活性物质的又一重要来源。 的生物制品。 研究发现，这种纤溶酶的分子质量是作用的温度。 酶动力学分析表明该酶具有降解苯甲酰乙酯盐酸盐的活性。 也有报道从白色念珠菌[]发酵中分离出纤溶酶。 分离纯化这些菌株产生的纤溶酶，研究其性质，研究其药理作用，甚至进一步通过蛋白质工程改造，生产溶栓药物，特别是口服溶栓药物，以达到溶栓的目的，具有重要的社会和经济意义。治疗和预防血栓栓塞性疾病。 .

鉴定章节 产纤溶酶菌株的鉴定 纤溶酶是治疗和预防心脑血管血栓栓塞性疾病的药物 微生物是纤溶酶的重要来源之一。 筛选鉴定大量产蛋白酶微生物，特别是非致病微生物，获得新的产纤溶酶菌具有实际意义。 已分离鉴定出多种产纤溶酶的细菌，如枯草芽孢杆菌[、链霉菌、根霉菌]，它们已被开发或正在开发利用。 芽孢杆菌菌株是本实验室从自然界中分离得到的高产胞外纤溶酶菌株。 本实验对其形态特征、生理生化特征进行了鉴定，并对其序列进行了测定和比较，以确定其分类地位。 材料与试剂本实验室分离、筛选和保存芽孢杆菌属菌株。 介质倾斜和液体种子介质组成参考。 发酵培养基为蛋白胨蔗糖试剂纤维蛋白原、等本公司常规试剂均为国产或进口分析纯。 方法纤溶活性测定纤维蛋白平板法【． 使用直径打孔器在每个孔中打孔并点样以测量溶解环的直径。 菌株的鉴定在培养箱中进行。 通过革兰氏染色观察细菌形态。 河北大学硕士学位论文生理生化特性参考《常见细菌系统鉴定手册》对菌株进行生理生化鉴定。 序列测定按常规方法提取菌株，扩增产物送上海生工进行通用引物测序，然后将测得的序列与数据库中的序列进行比对。 结果与讨论 发酵培养基用于测定纤维蛋白溶解活性。 取发酵液离心除去菌体，在纤维蛋白板各孔上点样，测量溶解圈直径。

结果菌株熔化圈直径是分类鉴定的形态学特征。 高温加热后应变仍在增长。 革兰氏染色观察细胞形态，呈短杆状孢子，多数成对或呈链状，带有椭圆形菌体。 生理生化特性芽孢杆菌菌株的生理生化鉴定结果见表。 可见芽孢杆菌菌株的生理生化特性与假丝状芽孢杆菌一致。 表芽孢杆菌菌株生理生化特性鉴定 序列测定及比对结果 芽孢杆菌序列登录号为 。 芽孢杆菌分别与下列菌株具有高度序列同源性。 芽孢杆菌序列如图所示。芽孢杆菌与参考菌株的序列相似性见表。 芽孢杆菌的系统发育树状图如图所示。 虽然该菌株的序列与Ugbi具有很高的同源性，但与其形态特征却有很大差异。 炭疽杆菌的形态特征之一是两端被切割而无鞭毛，在有氧条件下，菌体中心可形成椭圆形孢子。 蜡样芽孢杆菌的形态特征之一是杆状微米，具有形成链的倾向 [芽孢杆菌菌株序列] 砷菌株与参考菌株序列相似性鉴定 芽孢杆菌菌株系统发育树状图 生理生化特征结合序列比对结果鉴定该菌株为 。 该菌株与产生纤溶酶的益生菌蜡样芽孢杆菌密切相关[其产物可能适合开发为溶栓药物。 假丝状芽孢杆菌产纤溶酶的文献未见报道。 后续实验优化了菌株的发酵条件，分离纯化了蛋白质，分析了其性质。 第十章，河北大学理学硕士论文，优化假丝状芽孢杆菌菌株的发酵条件血栓形成是一种严重危害人类健康的疾病，而微生物是纤溶酶的重要来源之一。

近年来分离出多种纤溶酶产生菌，经发酵优化后单位产酶量更高。 本实验室从自然界的野生菌中筛选出胞外高产纤溶酶菌株 。 本文通过优化发酵条件，提高单位酶活力，为菌株产纤溶酶的分离纯化，进一步钻研纤溶酶基础。 材料与试剂假丝状芽孢杆菌菌株由本实验室分离、筛选、保藏。 介质倾斜和液体种子介质组成参考。 发酵基础培养基[根据文献]设计蛋白胨试剂 蔗糖 纤维蛋白原、、琼脂糖 其余试剂均来自本公司产品，均为国产或进口分析纯。 方法菌种培养法液体种子培养基培养法将斜面生长的菌株接种到种子培养基中，在摇床上培养至对数生长期的接种量，接种到发酵培养基中进行摇床培养。 发酵基础培养基培养法三角瓶液体容积摇床速培养至产酶高峰种子生长曲线图产酶高峰种子生长曲线绘制发酵液每隔一段时间加入灭菌水的方法[。 通过摇动插入种子的发酵培养基，每隔一段时间取发酵液离心除去细菌，确定酶产生的峰值。 《假丝状芽孢杆菌菌株发酵条件优化》，取上清液测定酶活性。纤溶酶活性的测定加入琼脂糖融化，放入水浴中，加入纤维蛋白原。时间到后，加入，快速混匀倒入板中，待冷却凝固后，用打径器在平板上打孔，在每个孔中放置样品保温，测量水解圆的大小，计算面积。

结果与分析菌株的种子生长曲线和发酵时间如图所示。 从图中可以看出，细菌在对数生长期后进入稳定期，故接种时间确定为 。 产酶峰值用酶活测定，发酵培养基的发酵酶活性达到峰值，从而确定发酵时间。 菌株发酵培养基组成的优化一式三份重复以下实验。 碳源的筛选 在不改变其他条件的情况下，不同的碳源替代发酵产酶基础培养基中的碳源。 实验结果如图所示。 可见菌株对碳源的利用十分广泛，其中麦芽糖对产酶重要。 力的改进是蔗糖，以蔗糖为碳源，考虑成本优化培养基。 不同碳源对菌株纤溶酶产生的影响。 筛选氦源。 蔗糖用作碳源。 使用不同的氮源替代基础培养基中的氮源。 其他条件不变。结果如图所示。 可见胰蛋白胨和豆饼粉的产酶量较高。 考虑到成本，采用大豆饼粉作为氮源对培养基进行优化。 豆饼粉在使用前煮沸过滤去渣。