先在钢瓶上面连接减压阀(用培养箱阀门)，再用软管连接到二氧化碳培养箱的CO2气体进口，软管两端用卡子固定好，钢瓶阀门开之前，确保减压阀关闭。钢瓶阀门打开之后，再开减压阀的小阀门，调节好压力，具体的要控制压力要设置在合理的压力范围内。
二氧化碳培养箱一般使用的压力都不会很高，培养箱都很娇贵的，所以一定要先调好减压阀出口的压力后再连接二氧化碳培养箱。二氧化碳减压阀装在钢瓶上面后，逆时针打开钢瓶总开关，减压阀右侧表显示钢瓶内压力，观察高压表读数，记录高压瓶内中的二氧化碳压力，压力很低表示二氧化碳量少，需重新充入二氧化碳，压力正常后，将减压阀出厂配置的调节手轮插入减压阀正面凸出凹洞处，顺时针缓慢转动减压阀调节螺杆，使其压缩主弹簧将活门打开，减压阀左侧表显示出气压力，这样进口的高压气体由高压室经节流减压后进入低压室，并经出口通往CO2培养箱。一般情况下，二氧化碳培养箱需要的压力在0.03Mpa – 0.06Mpa范围内，也有用到0.1Mpa的，需要根据实际情况而定。
仔细检查连接部位是否漏气，将肥皂液涂到连接处进行检查，如有气泡则调节连接，确认不漏气后进行实验。
使用完后，先顺时针关闭钢瓶总开关，再逆时针旋松减压阀。
