朗伯－比尔定律
当一束平行的波长为λ的单色光通过一均匀的有色溶液时，光的一部分被比色皿的表面反射回来，一部分被溶液吸收，一部分则透过溶液。这些数值间有以下关系：
I0＝Ia十Ic十It （2-3）
式中 I0——入射光的强度；
Ia——被吸收光的强度；
Ic——反射光的强度；
It——透过光的强度。
在比色分析中采用同种质料的比色皿，其反射光的强度是不变的，由于反射所引起的误差互相抵消，上式可以简化为： I0＝Ia十It 在入射光强度恒定的情况下，Ia越大即说明对光吸收的越强，也就是透过光It强度越小，光减弱的越多。
实验发现透过光强度与有色溶液中吸收物质的分子数量c以及透过溶液的厚度L有关。其数学表达式如下：
（2-4）
其中k为比例系数，其数值只取决于吸光物质的特性，而与吸收层厚度及浓度无关。式中又称为吸光度A，上式又可写为A＝kcL；
上式称为朗伯－比尔定律，是紫外－可见吸收法定量分析的基础。
2 吸光系数和摩尔吸光系数
在中，如果有色物质溶液的浓度c用g／L表示，吸收厚度以cm表示，比例常数k称为吸光系数。如果浓度c用mol／L表示，吸收厚度以cm表示，则比例常数k称为摩尔吸光系数。摩尔吸光系数的单位为l／(mol.cm)。它表示物质的浓度为1摩尔／升，液层厚度为1cm时溶液的吸光度。符号常用ε表示，因此朗伯－比尔定律又可写成：
A＝εcL （2-5）
当外界条件固定时，摩尔吸光系数的大小可以用来度量物质吸光能力的大小。摩尔吸光系数一般只能通过测量较稀溶液的吸光度来换算得到。
3 吸光度可加性原理
某一波长的入射光通过几个相同厚度的不同溶液，其总的吸光度为各溶液吸光度之和。同样如果溶液中含有不同的吸光物质，只要各组分间没有相互作用，溶液的总吸光度为各组分吸光度之和。这就是吸光度可加性原理。
吸光度可加性原理是十分有用的，例如进行光度分析时，试剂或溶剂有吸收，则可从所测总吸光度中直接进行扣除，这就是以试剂或溶剂做空白的依据。
