薄层层析法测定果酱中苯甲酸、山梨酸的含量
一、原理
先将样品酸化，然后用提取苯甲酸和山梨酸。再将提取液浓缩，点样于聚酰胺板上，经展开、显色后，并与标准点比较可进行概略定量。
二、试剂
6mol/L HCl(1:1) ：除去过氧化物
4%NaCl 酸性溶液 无水乙醇
聚酰胺粉：200目
展开剂：正丁醇：氨水：无水乙醇（7+1+2）
异丙醇：氨水：无水乙醇（7+1+2）
显色剂：0.04%溴甲酚紫（用50%的乙醇配制，并用0.1mol/L NaOH调至PH=8）
苯甲酸标准液（2mg/mL）：精密称取0.2000g苯甲酸，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中定容。
山梨酸标准液（2mg/mL）：精密称取0.2000g山梨酸，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中定容。
三、仪器
玻璃板（10×18cm） 微量注射器（10uL,20uL） 层析缸 喷雾器 吹风机
四、测定操作
1、样品处理
称取25g混合均匀的样品，置于100mL分液漏斗中加0.5mLHCl酸化，用15、10mL提取两次，每次振摇1分钟，静置分层后将醚层分出，合并提取液。用3mL 4%NaCl酸性溶液洗涤两次，弃去水层，静置15分钟，再分离出水层，将提取液通过移入25mL容量瓶中，加定容。吸取10.00mL提取液分两次置于10ml具塞离心管中，在约40℃水浴上挥干，加入0.1mL乙醇溶解残渣，备用。
2、聚酰胺薄层板的制备
称取1.6g聚酰胺粉，加0.4g可溶性淀粉，加约15mL水，研磨3分钟，在10×20cm玻璃板上使其均匀即涂成0.25-0.30mm厚的薄层，室温下干燥1小时，置于烘箱内80℃干燥1小时，取出后置干燥器中备用。
3、点样
在距薄层板下端2cm的基线上，用微量注射器点1uL、2uL样品液，同时分别点1uL、2uL苯甲酸、山梨酸标准溶液，点间距1.5cm。
4、展开显色
将点样后的薄层板放入预先盛有展开剂的展开槽中，展开槽内壁贴有滤纸，待溶剂前沿上展至10cm,取出挥干，喷显色剂，斑点黄色，背景蓝色。
5、定性与定量
把样品斑点与标准斑点比较，若与标准斑点同一位置线上出现样品斑点，说明样液中存在苯甲酸或山梨酸。然后根据斑点的面积大小及颜色深浅确定样品点的苯甲酸、山梨酸的含量，再进行计算。
五、计算
样品中苯甲酸的含量（g/kg）=
(山梨酸)
A——点样用样液中苯甲酸（山梨酸）的含量mg
M——称取的样品质量g
V1——溶解残渣时加乙醇体积mL
V2——点样的体积mL
