柱清洗与再生的推荐步骤

柱清洗与再生的推荐步骤
压力升高，色谱柱峰形发生变化如出现严重拖尾、肩峰甚至峰分岔，分离度降低，这些都强烈提示色谱柱受到污染。可采用以下步骤处理：如系统接有在线过滤器和保护柱，首先排查在线过滤器与保护柱，进行更新替换。日常操作中，当压力升高10%或柱效降低10%时，就应考虑更换在线过滤器和/或保护柱。
使用高比例的有机溶剂进行冲洗（请注意避免盐析出，通常可使用梯度升高法，然后维持在高比例甚至99%有机溶剂条件下）。此操作通常可洗去大部分污染物。如有机溶剂清洗不能解决问题，可采用如下方法进行色谱柱的清洗和再生。根据样品性质以及你所了解的污染物性质选择清洗方法，用20倍柱体积（即，对于4.6x250 mm柱，相当于80 mL）的HPLC级溶剂清洗色谱柱，将流动相温度升至35-55˚C可提高清洗效率。