二氧化碳培养箱是在普通培养的基础上，通过在培养箱内模拟形成一个类似细胞在生物体内的生长环境，如合适的温度（37°C）、恒定的二氧化碳水平（常用5%）、稳定的酸碱度（pH值7.2-7.4）、较高的相对饱和湿度（常用95%），来对细胞或组织进行体外培养的一种装置。广泛应用于细胞学实验、微生物学实验、组织学实验以及分子生物学实验。因此，二氧化碳培养箱的消毒、灭菌尤为重要。
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二氧化碳培养箱的污染
凡混入二氧化碳培养箱（细胞培养环境）中，对细胞生存有害的成分或造成细胞不纯的异物都应视为污染。细胞持续在污染环境中生长时，轻者生长缓慢、分化变形，较严重的情况则细胞增殖停止，从瓶壁脱落，甚至死亡。不同的污染物对细胞的影响也有差别，有的影响是长期、缓慢和潜在的，有的则在很短的时间内抑制细胞生长，或产生有毒物质灭细胞。根据污染源不同主要可以分为：生物性污染、化学性污染、物理性污染和气溶胶污染。
1.1生物性污染
这是见也是危害的污染，如细菌、病毒、真菌，支原体等。这些污染源有可能是人为带入，或是细胞在放入培养箱之前已经被污染，再或者是箱体本身没有消毒干净。体外培养的细胞自身没有抵抗污染的能力，而培养基中所加抗生素的抗微生物污染的能力也有限，因此细胞微生物污染一旦发生往往无法挽救。
1.2化学性污染
培养箱中许多化学物质都会引起细胞污染，如细胞培养容器清洗过程中残留的洗涤剂、加湿器中未纯化的水、人为带入的液体或气体。不同化学物质对细胞污染是不一样的，有的可能促进或抑制细胞生长，有的可能杀死细胞。
1.3物理性污染
培养环境中的物理因素，如温度、放射线、振动、辐射（紫外线或荧光）会对细胞产生影响。物理性污染常常被人们所忽视，或被笼统地归为化学性污染。其主要是在代谢水平或分子水平上，影响细胞正常的生理过程。
1.4气溶胶污染
气溶胶是液体或固体微粒均匀地悬浮在气体介质中的分散体系，当微粒是微生物时，就是微生物气溶胶，如果这种微生物是病原性的，就是病原微生物气溶胶。细菌、病毒等病原体通过气溶胶可在人与人、人与环境之间传播。
微生物气溶胶可分为两大类：一类是飞沫核气溶胶，另一类是粉尘气溶胶。医学实验室内许多操作都可以产生气溶胶，并且大多可能是病原微生物形成的感染性气溶胶，由于其气溶胶分子小，漂浮在空气中、粘附于人身上，易在空气中扩散而污染实验室的空气。
02
清洁、消毒、灭菌处理
2.1清洁
清洁是指去除灰尘、污垢和有机污渍。清洁方法包括刷、吸、干擦、洗涤，或用浸泡肥皂水、清洁剂的湿布拖擦。粉尘、污物以及有机物是微生物的栖身之所，并可能影响除污染剂（抗菌剂、化学杀菌剂、消毒剂）的作用。必须先经过清洁才能实现消毒和灭菌的目的，许多杀菌剂只对经过清洁过的物品才具有杀菌活性。清洁时必须使用与后续使用的消毒剂或杀菌剂化学性质上相容的试剂。
（1）清洁箱体表面：先拂去表面的灰尘，再用湿的海绵或软布清洗，再用软布擦干。如果有污物则用低浓度的清洁剂清洗，然后擦干。
（2）清洗箱体内部：选择合适的消毒剂。所有的物件表面必须清洗，然后用无菌水冲洗，再擦干或晾干。
（3）清洗玻璃门：清洗箱内的玻璃门所用的清洁剂与清洗培养箱内部时使用的相同。然后用蒸馏水漂洗，从而清除残留的清洁剂，最后用软布把门擦干。
2.2消毒和灭菌
消毒是指杀死微生物的物理或化学手段，但不一定杀死其孢子。灭菌是指杀死所有微生物，当培养箱内细胞受到污染时需采用灭菌措施。一般，在培养箱内细胞没有污染的情况下平均1-3个月消毒一次。常用的三种消毒灭菌的方式是：液体消毒剂、紫外和加热。
（1）液体消毒剂：选择对培养箱无腐蚀性的液体消毒剂。液体消毒剂的消毒效果好坏和很多因素有关，比如场所的温度、接触时间、pH、穿透能力、有机物的反应，这些因素中一些很小的变化可能造成去污效果的不同。因此液体去污剂不是可信赖的方法。
（2）紫外：一般先用蒸馏水清洗干净后，再用紫外灯照射（带紫外灯的培养箱）一天，或者用手提式的紫外灯照射。
（3）加热：湿热和干热被认为是杀菌有效的方法。干热160℃-170℃、2-4小时在不具有渗透性、非有机体的物质（如玻璃）是可行的净化方法,但是甚至在有机体或非有机体的浅层也不能被绝缘。
除了以上几种方法外，还可同时使用几种消毒灭菌方法来达到清洁的效果。
2.3消毒注意事项
（1）不要使用强碱、强腐蚀性的试剂，以及含高含量次氯酸钠的漂白剂和消毒剂，虽然不锈钢有耐腐蚀性，但不是不受腐蚀。
（2）避免在二氧化碳传感器上喷洒清洗剂，清洗之前要使传感器充分冷却。一般清洗用的水是蒸馏水或去离子水，不能用自来水。
（3）挥发性的甲醛有毒、易燃、易爆。如果在培养箱内残留甲醛的话，会影响细胞正常生长，甚至使细胞死亡。
常见问题
Q1:二氧化碳培养箱的主要污染源有哪些分类？
根据污染源不同主要可以分为：生物性污染、化学性污染、物理性污染和气溶胶污染。
Q2:细胞在受到污染后会出现哪些不良后果？
细胞持续在污染环境中生长时，轻者生长缓慢、分化变形，较严重的情况则细胞增殖停止，从瓶壁脱落，甚至死亡。
Q3:二氧化碳培养箱通常建议的消毒频率是多少？
一般，在培养箱内细胞没有污染的情况下平均1-3个月消毒一次。
Q4:清洁二氧化碳培养箱内部时，对清洗用水有什么要求？
一般的清洗用水是蒸馏水或去离子水，不能用自来水；所有物件表面必须清洗，然后用无菌水冲洗，再擦干或晾干。
Q5:使用液体消毒剂进行消毒时，有哪些注意事项？
应选择对培养箱无腐蚀性的液体消毒剂；消毒效果好坏受场所温度、接触时间、pH、穿透能力、有机物反应等因素影响，因此液体去污剂不是可信赖的方法。
