3-磷酸甘油酸激酶(PGK)测试盒
测定方法: 微量法
测定规格: 100T/96S
保存条件: 低温避光保存
有 效 期: 6个月
注 意: 正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的关键酶,广泛存在于动植物和微生物体内,催化1,3-二磷酸甘油酸转变为3-磷酸甘油酸,产生1分子ATP,具有影响DNA复制和修补及刺激病毒RNA合成等生物学功能,广泛应用于靶标设计。
测定原理:
3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP产生1,3-二磷酸甘油酸和ADP,1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脱氢酶和NADH作用下产生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸,340nm处的吸光度变化反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。
酶液提取:
①总 PGK 酶提取:建议称取约 0.1g 样本,加入 1mL 提取液,冰浴匀浆后超声破碎(冰浴,200W,破碎 3s,间歇 7s,总时间 1min),然后 4℃,500g 离心 5min,取上清测定。②胞浆和叶绿体 PGK 酶的分离:按照植物组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 样本,加入 1mL 提取液),冰浴匀浆后于 4℃,500g 离心 5min,弃沉淀,取上清在 4℃,8000g 离心 10min,取上清用于测定胞浆 PGK 酶活性,取沉淀加 1mL 提取液,震荡溶解后超声破碎(冰浴,200W,破碎 3s,间歇 7s,总时间 1min),然后 4℃, 500g 离心 5min,取上清测定叶绿体中 PGK 酶活性。
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