丙酮酸羧化酶(PC)测试盒
测定方法: 微量法
测定规格: 100管/96样
保存条件: 低温避光保存
有 效 期: 6个月
注 意: 正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylase,PC,EC 6.4.1.1)广泛存在于动物、霉菌和酵母的线粒体中,催化丙酮酸、ATP、CO2和水生成草酰乙酸、ADP和Pi,是糖异生过程的 个限速酶,在保证的动态平衡方面起着重要的作用。
测定原理:
PC催化丙酮酸、ATP、CO2和水生成草酰乙酸、ADP和Pi,苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH生成苹果酸和NAD+,在340nm下测定NADH氧化速率,即可反映PC活性。
需自备的仪器和用品:
分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
样本的前处理:
组织、或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:
1、称取约0.1g组织或收集500万或细胞,加入1mL提取液,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2、将匀浆600g,4℃离心5min。
3、弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。
4、上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的PC(此步可选做)。
5、在步骤④的沉淀中加入1mL提取液,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3秒,间隔10秒,重复30次),用于线粒体PC活性测定。
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