CCK-8(Cell Count Kit-8)是一种利用WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)快速检测细胞增殖或毒性试验的方法。WST-8是一种类似MTT的四唑盐,在电子载体的存在下,被活细胞内的脱氢酶还原生成水溶性的橙黄色Formazan(甲臜),通过比色法检测甲臜生成量可以反映试验中活细胞的数量。
注意事项:
1. 使用前先将低温保存的试剂在室温条件下放置20-30 min。
2. 接种对数期生长的细胞,注意使细胞分散均匀,确保每个复孔中的细胞数量一致,减少误差。
3. 为了达到的实验效果,建议*行预实验,确定的细胞接种密度及CCK-8试剂孵育时间;以贴壁细胞为例,接种密度约1~5×103个/孔;孵育时间为1~4 h,多数细胞孵育约30 min即可观察到明显的颜色变化。
4. 设置空白对照,在无细胞的培养基中加入CCK-8检测,去除本底对吸光值的干扰。
5. 如果OD值太高,建议降低细胞接种密度或减少CCK-8试剂孵育时间。
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