分光光度计已在药检、医疗卫生、化学化工、环保地质、冶金、石油、食品、生命科学、材料科学、农业科学等各个领域的科研、生产中 , 得到广泛的应用。在定量分析、纯度检查方面更是的分析仪器。从事分光光度计计量检定几年来, 发现分光光度计使用中存在一些应注意的问题。
1 应注意待测溶液浓度过高(即吸光度太大)或过低(即吸光度太小)对测试结果准确性的影响在实际工作中, 用分光光度计测溶液时, 被测溶液浓度太高或太低都能产生比耳定律的偏离 ,从而使吸光度(透射比)误差变大 。吸光度(透射比)误差越大, 测量结果的可信性就越差。例如 :设某试样的浓度为 C ,则由朗
伯—比尔定律: A =-1gT =εbc (1)式中 :A —物质的吸光度;T —物质的透光率 ;ε—物质的吸光系数;b —被分析物质的光程;c—物质的浓度。

将(1)式微分 ,

则 :  
 -d1gT =0.434d1nT =-0.434dT =εbc (2) 
(1)式除(2)式 ,则:  
 dc = -0.434  =dT  (3)
   c  T1gT  
将(3)式以有限式表示 ,则: 
 c = -0.434 T  (4)
 c  T 1gT  
(4)式中 c 为浓度相对误差, T 为透光度误差。
  一般分光光度计的 T 约为 ±0.2 %～ ±2.0 %。若按目前大多数分光光度计厂家标准的规定, 取 T = 0.5 %,代入(4)式 ,则计算出不同透光率或不同吸光度值的浓度相对误差由表 1 可知, 浓度测量的相对误差大小和吸光度值所处的范围关系很大。因此在测样中 , 选择适当的吸光度范围非常重要。目前分光光度计使用者所使用的 721 、722 、723 、752 、756 等分光光度计的吸光度线性动态范围都很小, 有的在(0.2 ～ 0.9)A 左右, 因此分光光度计的使用者应注意通过改变吸收池厚度或待测样的浓度 , 使被测吸光度读数在仪器的吸光度线性动态范围内 ,从而减小比耳定律的偏离 ,得到较准确的测量结果。2 应注意仪器“0”点和基线的校准对测试结果准确性的影响仪器“0”点的校准主要针对可见分光光度计中,“0”点和“100 %”点分开调校的仪器。有些分光光度计使用者在用分光光度计测样时, 当大幅度改变波长时 ,会稍等片刻,等灯热平衡后 , 重新校准“100 %” 点, 而忽视“0”点的重新校准。其实在大幅度改变波长重新校准“100 %” 点后,“0”点的数值也改变了, 如果不进行“0”校准 ,“0”点的数值将直接影响测试结果的准确性。正确做法应在大幅度改变波长后 , 先重新校准“100 %”点再重新校准“0”点然后测样。

基线的校准主要针对带全波长扫描功能的分光光度计。当分光光度计使用者使用波长扫描功能对样品测试、分析时(尤其当被测样品浓度较小时), 就必须注意仪器基线的好坏对测试结果的影响。因为当基线偏离吸光度“0A”以下时(即发生负偏), 如果扫描分析的样品浓度较小 ,吸光度峰值比较低 ,可能就检测不出样品值 ,从而影响到测试结果。所以在测量前应进行基线校准(以空气为参比样)。而在基线校准后怎样判断基线是否校准成功,方法如下:首先选择波长扫描功能, 在扫描参数设置中 :将扫描模式为 :A(即吸光度), 吸光度量程将扫描速度设为:中速;波长范围设为 :实际需要波长范围;取样间隔:1nm ;仪器光谱带宽 2nm (无光谱带宽调整挡的仪器不设)。