2. 样品测定

(1)小麦样品的制备与测定 ①将粉碎过100目筛的小麦样品在80℃下烘干至恒重，取出置于干燥器中冷却备用。 ② 称取两份约0.2 g 的干燥样品，分别放入两个干燥的锥形瓶中。 然后向每瓶中加入5 ml 10.05 ml/L Na( ) H溶液润湿，然后加入20 ml饼干试剂（为什么？），振荡15 min，混匀，静置反应30 min，过滤分别（为什么？？），取滤液在540nm波长下比较，在标准曲线上找出相应的蛋白质含量（mg）（为什么？）o

(2) 家畜血清样品的笛制备及测定 ① 空腹采集动物静脉血，不加抗凝剂（为什么？），室温等待自凝（5-10 min）。 通常，3小时后，血凝块收缩并沉淀出血清。 血清沉淀后及时分装，防止溶血，并稀释10倍直至冰冻保存。 ②取两份血清，各1.0ml，分别加入4份铋腺试剂，摇匀，37℃（为什么？），20分钟后，用分光光度计在T 540nm波长处比色，测定标准曲线中的颜色。上面检测出相应的含有蛋白质的长度。

(3) 每次测量时必须使用空白管进行调零。

六结果处理

从标准曲线得出蛋白质含量（mg）

样品蛋白（%）=-------------------------------- X100X ge蛋白纯度

样品重量（毫克）

测量管光密度 100 测量管光密度 被测血清总蛋白 (g/100ml) = ---------------- X0.05 X ------- = -- - ------------ X5

标准管光密度0.1 标准管光密度七备注

1、三角烧瓶必须干燥，防止样品（小麦粉）粘在烧瓶壁上。

2、若采用小牛血清（BSA）蛋白含量（mg/ml），则1mg/ml的A丸（540nm波长吸光度）应为0.66

以纠正其纯度。

3、测量管与第六管相同。

八个有趣的

1.分光光度法的基本原理是什么？

2、通过缩脸颊来测量蛋白质含量长度的原理是什么？

3、为什么双眼皮缩小法简单快速但不准确？