2025年10月15日 09:02:59 来源:石家庄环保设备有限公司 >> 进入该公司展台 阅读量:8
DNA 提取是一项经常进行的实验。 DNA提取的方法你知道多少?
1. 浓盐法提取DNA

①利用RNA和DNA在电解液中的溶解度不同,将二者分离。 常用的方法是用1M氯化钠提取氯化钠,将得到的DNP粘液用含有少量辛醇的氯仿摇匀乳化,然后离心去除蛋白。 此时,蛋白凝胶停留在水相和氯仿相的中间,而DNA则位于上层水相。 使用 2 倍体积的 95% 乙醇沉淀 DNA 钠盐。
②也可用0.15M氯化钠溶液反复洗涤细胞破碎液去除RNP,再用1M氯化钠提取脱氧核糖蛋白,再用氯仿-异醇法去除蛋白。
比较这两种方法,后一种方法可能引起较少的核酸降解。
③ 用溶液提取DNA时,加入适量的去垢剂,如SDS,有助于蛋白质和DNA的分离。 在提取过程中,为了抑制组织中DNase对DNA的降解,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的络合剂,通常为0.15M氯化钠、0.015M柠檬酸钠,称为SSC溶液提取 DNA。
2. 阴离子洗涤剂法提取 DNA
用SDS或二甲苯钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA,因为DNA和细胞中的蛋白质常以静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能破坏这种价键,所以阴离子去污剂通常用于提取 DNA。

3. 水提法提取DNA
利用核酸溶于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液去除RNA,然后将沉淀溶解于水中使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液,加入固体氯化物将上清液的钠浓度调至 2.6M。

加入2倍体积的95%乙醇,立即搅匀,然后分别用66%、80%和95%乙醇和丙酮洗涤,最后风干即得DNA样品。 这种方法提取的DNA蛋白质含量较高,一般不采用。 为了去除蛋白质,可以通过在提取过程中添加 SDS 来改进此方法。
4. 酚提取法提取 DNA
作为蛋白质变性剂,同时抑制DNase的降解。 当用处理匀浆时,由于蛋白质与DNA之间的键已断裂,蛋白质分子表面含有许多与相似的极性基团。 蛋白质分子可溶于酚相,而 DNA 可溶于水相。 离心分离后,取出水层,重复操作数次,合并含有DNA的水相,利用核酸不溶于乙醇的性质,用乙醇沉淀DNA。 此时的DNA是一种非常粘稠的物质,可以用玻璃慢慢卷成一团取出。 这种方法的特点是将提取的DNA保持在自然状态。